银杏内酯B促进小鼠触须毛囊生长发育的机制探索
沈于宸 朴永君 宋智琦
大连医科大学附属第一医院
背景与目的:
目前现有的治疗手段和措施并不能完全满足脱发患者的治疗需求,有研究显示,银杏内酯 B(Glinkgolide B,GKB)能通过提高毛乳头细胞活力,促进血管内皮生长因子的分泌以及诱导β-catenin的活力最终促进毛囊生长发育。毛囊干细胞和 Wnt 经典通路在毛囊的周期性转化及生长发育中起到关键的作用。本研究通过分离完整的小鼠生长期毛囊,并利用 Williams E 培养基进行体外培养, 来构建触须毛囊器官培养体系,进一步来探索银杏内酯 B 促进毛囊生长发育的机制。
方法:
1.分离小鼠生长期触须垫毛囊,并随机分为两组:对照组、50μM 银杏内酯B组,置于毛囊器官培养基中培养,隔天换液,并于培养第 0 天、第 2 天、第 4 天拍照,并测量毛干伸长长度来观察银杏内酯 B 是否能促进生长期毛囊毛干生长。
2.取培养 4 天后的毛囊提取总 RNA,利用实时荧光定量聚合酶链反应(Realtime polymerase Chain Reaction,RT-PCR),观察 Wnt 经典通路及毛囊干细胞相关 mRNA 的相对表达量。
3.取培养 4 天的毛囊进行 HE 染色(hematoxylin-eosin staining ),观察毛囊 形态变化判断毛囊所处生长周期。
4.取培养 4 天的毛囊用免疫荧光技术(Immunofluorescence technique)染色,
观察两组毛囊毛母质细胞及毛囊干细胞增殖情况
结果:
1.成功分离小鼠触须垫毛囊并进行体外培养。毛干伸长长度测量结果显示银
杏内酯 B 促进毛囊毛干长度增长。
2.RT-PCR 结果显示,50μM 银杏内酯 B 处理组上调毛囊干细胞相关基因
CD34、Krt15、Lrig1 的 mRNA 相对表达量以及 Wnt 通路相关基因 Wnt5a、β- catenin、Lef1 的 mRNA 相对表达量。
3.免疫荧光染色观察到,50μM 银杏内酯 B 处理组的毛囊毛球部 ki67 和 k15
荧光表达量高于对照组表达更多的 ki67 阳性细胞及 k15 阳性细胞,说明银杏内酯 B 可以促进毛母质细胞及毛囊干细胞的增殖。
结论:
银杏内酯 B 能促进小鼠触须毛囊毛干长度伸长,可能是银杏内酯 B 上调 Wnt通路相关基因 Wnt5a、β-catenin、Lef1 和毛囊干细胞相关基因 CD34、Krt15、Lrig1 的表达,以及上调毛母质细胞增殖指标 ki67 荧光表达量和毛囊干细胞k15 荧光表达量有关,综上我们认为银杏内酯 B 有益于毛囊生长发育。